一文读懂中空纤维膜的常规使用工艺（续集）

2、细胞及裂解液澄清

细胞澄清用于回收细胞培养过程中表达于细胞外的目的产物，而若目的产物存在于胞内，需进行裂解释放后进行裂解澄清。

组件选择时，由于进样料液中的颗粒含量较高，一般选用流道较短（如20或41.5cm）、纤维内径较大（如0.75或1mm的组件），而膜孔径至少应为目的产物的10倍。

但实际操作时，组件和工艺的选择需考虑目的产物的形态和稳定性、起始料液浓度和体积、终产物浓度和产物活性等因素。如使用哺乳动物细胞生产治疗性蛋白，包括单克隆抗体时，可选用长度20或41.5cm、内径1mm，孔径0.2或0.65μm的微滤组件，起始循环流速可调节为4000S^-1剪切以内，如发现对细胞或产物有影响，可适当降低流速。通常可先对料液进行10倍左右的浓缩，缩短处理时间，再进行一定体积的洗滤，提高产物收率，如在纯化CHO表达的单克隆抗体时。而在纯化HEK239或HeLa细胞表达的病毒产物时，应注意适当降低剪切，以提高病毒活性。

回收细菌细胞，如大肠杆菌表达的目的蛋白时，如产物较小（＜60KD），可选用截留分子量500KD或750KD的超滤组件，而当产物较大时，则选用0.2μm的微滤组件，一般先测试使用纤维内径1.0mm、长度20cm的组件。然后再放大至41.5或60cm的组件。由于细菌细胞对剪切的耐受性较高，可达10000S^-1以上，所以在操作时，可适当提高循环流速，以避免膜表面形成凝胶层。一般情况下，如使用超滤膜，可将TMP控制为15~20psi，而使用微滤膜时，可将滤液流速控制在20~30LMH范围内。

酵母细胞是另一种常用的蛋白表达系统，如毕赤酵母。处理组件选择时，如目的产物较小，可使用750KD的超滤组件，而较大时，可使用0.2μm的微滤组件。但此类料液往往粘度较大，容易形成入口高压，导致工艺失败，所以一般选用内径1mm、长度20cm的组件，同时控制循环流速，以使入口压力不超过10psi。酵母细胞或裂解液澄清时，通常不浓缩，直接进行5体积左右的洗滤，即可获得较高的处理效率。

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